近日，由中科院及中國農(nóng)科院等單位合作的研究團隊在《Cell Discovery》雜志上發(fā)表了一篇題為“p72 antigenic mapping reveals a potential supersite of vulnerability for African swine fever virus” 的研究性論文,。該研究發(fā)現(xiàn)了一個非洲豬瘟病毒的超脆弱位點,，為非瘟疫苗開發(fā)開辟了新的框架。

非洲豬瘟（African swine fever,，ASF）,，1921年在肯尼亞首次發(fā)現(xiàn)，是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus,，ASFV）引起的一種急性出血性病毒性疾病,，死亡率高達近100%。在過去幾十年中,，ASFV已擴散到許多國家和地區(qū),，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。ASF被世界衛(wèi)生組織指定為一種重新出現(xiàn)的病毒性疾病,，目前尚無可用的疫苗或治療方法,。

p72是非洲豬瘟病毒外部二十面體蛋白衣殼中的主要結(jié)構(gòu)蛋白之一，占病毒總質(zhì)量的33%以上,，是非瘟病毒主要的保護性抗原之一,。它們與其他蛋白一起，形成了病毒的保護性外殼,。

目前還沒有關于p72表位的結(jié)構(gòu)信息,。為鑒定p72的抗原表位,，分析抗體特性，探討其中和機制,，本研究采用流式細胞術對5頭ASFV感染豬外周血單個核細胞中的漿母細胞進行分選,。酶聯(lián)免疫斑點試驗表明，近一半的這些細胞分泌的抗體結(jié)合p72,。

成功地從單細胞cDNA中擴增了59個IgG序列,，然后通過轉(zhuǎn)染293 T人胚腎細胞產(chǎn)生重組mAb。對59個豬IgG抗體和人源IgG抗體的互補決定區(qū)（CDR）長度進行比較,，發(fā)現(xiàn)豬源HCDR3（約15.4個殘基）比人源HCDR3（約16.2個殘基）短約10%,。豬的HCDR2（~9.7個殘基）和LCDR1（~9.8個殘基）分別比人的HCDR2（~7.8個殘基）和LCDR1（~7.4個殘基）長~25%和32%，而HCD1,、LCDR2和LCDR3的長度相似,。選擇9個豬抗體用于結(jié)構(gòu)和功能研究。9個Fab的可變區(qū)的氨基酸序列比對分別揭示了輕鏈和重鏈的兩組和三組,。值得注意的是,，在輕鏈中，在兩組之間清楚地觀察到相對較低的相似性（約40%）,。根據(jù)各組輕鏈和重鏈的組合,，我們將這9種抗體分為四類：I）B1、H5,、D 7和E5,；II）F11和F5；III）C9和H3,；IV）G6（圖1）,。

Fab片段B1、F11,、C9和G6的結(jié)構(gòu)和功能表征

在實驗中發(fā)現(xiàn)一個病毒中和的超級位點,。對p72所有可用氨基酸序列的保守性分析表明，p72上的表位對于這四種抗體的結(jié)合位點是保守的,?？贵w的不同結(jié)合模式揭示了 p72 介導的 ASFV 中和的多種假定機制,。由于p72以五對稱,、三對稱和拉鏈三種形式組裝，因此p72殼粒采用不同的排列方式以允許三種不同的組裝模式：“頭對背”,、“頭對頭”和“背對背” ,。

研究者們將 p72-抗體復合物的結(jié)構(gòu)疊加在三種形式上。他們發(fā)現(xiàn) 三對稱和拉鏈中相鄰 p72 上的抗體（B1,、F11,、C9 和 H3）之間存在大量沖突,，并且 五對稱 和 拉鏈 中也存在一些沖突。這四種抗體有可能由于空間沖突產(chǎn)生的機械力而導致衣殼解離,。G6介導的沖突相對較少,，在所有三種形式中僅位于p72三聚體內(nèi)部，這與相對較弱的中和活性一致,?；蛘撸@些抗體的結(jié)合可能會干擾假定的細胞受體與病毒衣殼的附著,。

基于這些觀察結(jié)果,，他們推測 p72 定向抗體對非瘟病毒的中和可能涉及推定受體結(jié)合位點的空間閉塞或 AFSV 衣殼完整性的破壞?？傊?，他們對針對 AFSV 關鍵 p72 抗原的抗體的研究揭示了可能參與病毒中和的抗原超級位點，從而為開發(fā)疫苗以預防非瘟傳播提供了框架,。

原文鏈接：https://www.nature.com/articles/s41421-024-00692-x